化妆品眼刺激性试验方法鸡胚绒毛尿囊膜试验介绍:测试化妆品对眼的刺激强度

20次 2025.01.06

  随着生活水平的提高,大众对化妆品安全性的要求也越来越高,越发关注产品的天然、温和、无刺激等特性。眼刺激性评价是化妆品原料及产品安全性评价的主要内容。传统眼部刺激试验采用试验动物进行,如经典的 Draizer免眼试验,不仅外推到人具有一定的风险,而且造成动物极大的痛苦。


  近年来,在全球化动物保护运动的影响下,多种替代动物试验的体外方法得到开发和应用,其中眼刺激性替代试验有鸡胚绒毛尿囊膜试验(Hen's egg test on the chorioallantoic membrane, Het -Cam Test)、重组人角膜组织模型(Human Corneal Epithelium Models,HCEM)、中性红摄取试验(Neutral Red Uptake Test,NRU)、红细胞融血试验(Red Blood Cell Test,RBC)等。在这些替代试验中,鸡胚绒毛尿囊膜试验因其费用低、操作简便与人体试验结果相关性高等原因,已成为目前化妆品及化学品眼刺激性体外试验的主要研究方法之一。




  作为第三方检测中心,中科测试机构拥有CMA和CNAS认证检测资质,检测设备齐全,数据科学可靠,可出具国家认可的化妆品眼刺激性试验报告。


  眼刺激性试验方法


  将化妆品样品用去离子水配制成质量分数为1%的溶液。


  参照出入境检验检疫行业标准中化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验的标准,采用反应时间法,将9日龄鸡胚进行照蛋检查,在蛋壳表面标记气室位置;用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分,暴露白色蛋膜。


  用吸管吸取适量质量分数0.9%NaCl溶液使蛋膜湿润后,将溶液倾出。小心用镊子去除内膜,保证血管膜不受损。分别吸取0.3mL的被测试剂,滴加在绒毛尿囊膜表面,记录5min内开始出现出血、血管融解、凝血的时间,期间录影并拍照,每款化妆品样品做6次平行试验。


  眼刺激性评分标准


  根据采用反应时间法,即IS(刺激评分)法作为评分标准。根据计算出的IS数值,按以下范围对受试物眼刺激性进行分类。


  鸡胚绒毛尿囊膜试验的眼刺激分级为:IS<1、1≤IS<5 、5≤IS<9和  IS≥9分别表示无刺激性、轻刺激性、中度刺激性和重度刺激性4个级别。


  根据文献,将出血、凝血、血管融解划分为不同等级。


  出血:1)无出血;2)轻度出血,仅见小血管出血和少量出血(如质量分数为0.5%ASV作用5 min);3)中度出血,小血管和大血管出血,并有明显的血液流出(如质量分数为1%ASV作用5min);4)重度出血,几乎所有的血管出血,并有大量的血液流出( 如质量分数为 5% ASV 作用5 min)。


  凝血:1)无凝血;2)轻度凝血,血管内或(和)血管外轻度凝血(如质量分数为0.2%氧化钠作用5 min);3)中度凝血,血管内或( 和)血管外中度凝血(如质量分数为0.3%氢氧化钠作用5min);4)重度凝血,血管内或(和)血管外重度凝血(如质量分数为 0.5%氢氧化钠作用5min)。


  血管融解:1)无血管融解;2)轻度血管融解:仅小血管融解(质量分数为0.5%ASV作用5min);3)中度血管融解,小血管和大血管融解( 质量分数为1%ASV作用5min);4)重度血管融解,大血管和全部血管树都融解( 质量分数为5%ASV作用5min)。


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