细胞毒性检测能够评估化学物质、药物、生物制剂、医疗器械及其材料等外源性物质对生物体细胞潜在危害。通过细胞毒性试验，可以了解这些物质对细胞形态、生长速度、代谢功能、基因表达等方面的影响，从而预测其在生物体内的潜在毒性。这对于保障人类健康、推动新药研发、促进环保事业等方面都具有重要意义‌。

　　细胞毒性介绍

　　‌细胞毒性是指某些物质或因素对细胞产生损伤和破坏作用‌。这种损伤通常涉及细胞膜结构改变、DNA损伤、蛋白质失衡等过程，可能导致细胞死亡或功能障碍‌1。细胞毒性的表现因致病原因不同而异，可能包括组织坏死、炎症反应、免疫抑制等‌。

　　细胞毒性可以由细胞或化学物质引起，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。为了确定是否存在细胞毒性，医生可能会建议进行血液测试以评估白细胞计数、肝肾功能指标等；此外，活检也是常用的诊断手段，通过取样分析受损组织中的细胞来确认是否存在细胞毒性‌。

　　在实验中，细胞毒性通常用于描述某种物质对培养细胞的毒性，常用P-388LulZ0白血病细胞或KB肿瘤细胞作体外试验来检验。同时，细胞毒性检测实验也可用于衡量细胞毒性化合物引起细胞损伤或细胞死亡的能力‌。

　　细胞毒性检测标准

　　YY/T0127.9-2009 口腔医疗器械生物学评价第2单元:试验方法细胞毒性试验：琼脂扩散法及滤膜扩散法

　　GB/T16886.5-2017 医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验

　　GB/T41915-2022 纳米技术MTS法测定纳米颗粒的细胞毒性

　　YY/T0127.18-2016 口腔医疗器械生物学评价第18部分：牙本质屏障细胞毒性试验

　　YY/T0993-2015 医疗器械生物学评价纳米材料：体外细胞毒性试验（MTT试验和LDH试验）

　　细胞毒性检测步骤

　　‌1.制备细胞悬液并进行计数‌

　　消化汇合的单层细胞，收集细胞至含血清的培养基中。

　　离心细胞悬液，使细胞沉淀，用培养基重悬并计数，确保细胞数量准确‌。

　　‌2.接种细胞‌

　　将细胞悬液接种到96孔板中，每孔约100μl，细胞数量根据实验需求确定，通常为几千个细胞每孔‌。

　　设置重复孔，一般每个样本设置3-6个重复孔以提高实验的准确性‌。

　　‌3.培养细胞‌

　　将接种好的细胞放入37℃、5%CO2的培养箱中培养，让细胞贴壁或生长至合适密度。贴壁细胞通常需要2-4小时，悬浮细胞则无需此步骤‌。

　　‌4.加入毒性物质‌

　　向培养板各孔中加入不同浓度的毒性物质（药物、化学试剂等），浓度范围根据药物的毒性有所了解后确定‌。

　　‌5.孵育‌

　　将加入毒性物质后的培养板放入培养箱中孵育一段时间，如6、12、24、48小时，具体时间视待测物质性质和细胞敏感性而定‌。

　　‌6.加入检测试剂‌

　　对于CCK-8法，向每孔中加入10μlCCK-8溶液，轻轻晃动培养板以帮助混匀，或直接配置含10%CCK-8的培养基进行换液。加样过程中尽量避免产生气泡‌。

　　对于MTT法，去除培养基（若药物不影响吸光度可不去除），每孔加入10μlMTT溶液，37℃孵育4小时，待其生成甲臜结晶‌。

　　‌7.测定吸光度‌

　　使用酶标仪测定特定波长下的吸光度，如CCK-8法通常测定450nm的吸光度，MTT法则测定570nm的吸光度‌。