玩具微生物挑战性试验能够检测玩具表面和内部的微生物污染情况，确保玩具在使用过程中不会对儿童健康造成威胁。通过模拟真实使用环境，评估玩具在特定条件下的微生物生长情况，可以有效预防因玩具污染导致的疾病传播‌。

　　玩具微生物挑战性试验方法步骤

　　（1）‌试验准备‌：

　　‌试验材料‌：需要准备恒温培养箱、显微镜、灭菌平皿（直径为9cm）、pH计、高压灭菌锅、酒精灯、锥形烧瓶、量筒、灭菌刻度吸管（10ml、2ml、1ml）、试管等仪器‌。

　　‌培养基和试剂‌：生理盐水、SCDLP液体培养基、卵磷脂、吐温80-营养培养基等‌。

　　（2）‌微生物准备‌：

　　‌菌种选择‌：选择适当的微生物进行挑战试验，通常选择杂菌，可以从污染产品中提取菌种‌。

　　‌菌种培养‌：将各菌种接种于合适的培养基中，于37℃培养箱中培养48小时，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中，制成一定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用‌。

　　（3）‌试验过程‌：

　　‌样品准备‌：称取玩具样品，加入灭菌的容器内，加入混合细菌悬液，充分混匀。每克样品含细菌量为5×10^6CFU/克或CFU/ml‌。

　　‌培养条件‌：将样品置于28℃下培养，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果‌。

　　‌取样分析‌：在接菌的0、7、14、21、28天取样分析，准确称取10克样品，加入含有玻璃小球和90ml灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀，此悬液为1:10稀释液；然后再用生理盐水按1:10依次稀释，按平板倾注法计数样品中含菌量，细菌培养37℃下48小时‌。

　　（4）‌判定标准‌：

　　‌通过标准‌：第28天时，样品中含细菌在10^2cfu/g(ml)-10^3cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用‌。

　　‌高效标准‌：从第7天起，样品中的细菌<10cfu/g(ml)，说明该样品的防腐体系对微生物有特强的抑杀作用，通过挑战试验‌。

　　许多国家和地区的安全标准要求对玩具进行微生物挑战性试验，以确保其符合相关的卫生和安全要求。例如，欧盟的EN71-3标准和美国的ASTMF963标准都要求对玩具进行微生物测试，以验证其安全性‌。