药物体外抗菌活性测试方法有哪些


体外抗菌实验指体外条件下,测定细菌/真菌对测试样品的敏感程度。药物体外抗菌活性测试主要用于抗菌药物的筛选、药物的抗菌谱测定及临床药物敏感性试验等方面。
抑菌实验与杀菌实验的区别
药物体外抗菌实验分为抑菌实验和杀菌实验,抑菌实验可测定仅有抑制细菌/真菌生长繁殖而无杀灭作用的测试样品;杀菌实验可测定不仅抑制而且能杀灭细菌/真菌的测试样品。
抑菌实验—测试样品对细菌是否具有抑制生长作用,测试时培养环境为培养基,即测试过程中细菌可以继续生长繁殖。
杀菌实验—测试样品对细菌是否具有杀灭作用,测试时培养环境为PBS/生理盐水,即测试过程中细菌不再生长繁殖。
药物体外抗菌活性测试方法
抑菌实验方法有OD值法、抑菌圈法、共培养+平板涂布计数法(一般培养环境为细菌/真菌培养基)、MIC。
杀菌实验方法有共培养+平板涂布计数法(一般培养环境为PBS/生理盐水溶液)、MBC。
(1)MIC/MBC测试:
将样品稀释成不同浓度(二倍稀释法),加入到微孔板/无菌试管中,在每个孔/试管中加入一定浓度的测试菌,培养一定时间后肉眼观察培养液的混浊情况,如果是澄清的,说明没有细菌的增长,即细菌的生长得到了抑制,培养液澄清的最小样品浓度为最小抑菌浓度,即MIC。
然后将澄清孔/管(3个样品浓度)取出涂布于培养基表面,若无细菌生长,则说明测试的菌已经被杀灭,此时的样品浓度为最小杀菌浓度,即MBC。
(2)平板涂布计数测试:
不同材料与菌液共培养一定时间后,不同组别(不同材料、不加材料)的菌液稀释一定倍数后涂布平板,以计算出不同组的菌液浓度。
通过与对照组比较,进而计算出实验组菌液浓度下降百分比,即得到材料对测试菌株的抗菌性能。
(3)抑菌圈测试:
供试材料含可溶性抗菌成分,此成分在琼脂培养基中可自由扩散,形成一定浓度的含药区域。由于各种微生物对不同材料或同一材料不同浓度的敏感性不同,因而形成不同大小直径的抑菌圈。
(4)OD值测试:
细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成正比,通过OD值可以定性反映出微生物的浓度或数量。
不同材料按比例与菌液共培养一定时间后,通过比较不同组别(不同材料、不加材料)菌液OD值之间的大小来判断不同材料的抗菌性能。
药物体外抗菌活性测试菌株
标准菌株常用的是金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、粘性放线菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌等。
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