溶血性链球菌检测

溶血性链球菌在自然界中分布较广，是一种常见的病原微生物，呈球形或椭圆形，直径0.6~1.0μm，呈链状排列，长短不一，从4~8个至20~30个菌细胞组成不等，链的长短与细菌的种类及生长环境有关。它广泛存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫或皮肤、黏膜伤口感染传播，而被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会使人类感染。

1、样品处理：取25g固体（或25mL液体）检样加入225mL灭菌生理盐水，制成混悬液。

2、吸取5mL混悬液接种至50mL葡萄糖肉浸液肉汤，或直接划线于血平板（如检样污染严重，可同时接种5mL至匹克氏肉汤），36℃培养24h，接种血平板，36℃培养24h,挑起乙型溶血圆形突起的细小菌落，在血平板上分纯，观察在液体和固体中的培养特征、溶血情况及革兰氏染色、形态，并进行链激酶试验和杆菌肽敏感试验。

3、链激酶试验：吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入链球菌18-24h 36℃肉浸液肉汤培养物0.5mL及0.25%氯化钙0.25mL，混匀，置于36℃水浴10min，血浆混合物自行凝固，观察凝块重新完全溶解的时间，完全溶解为阳性，如24h后不溶解即为阴性。同时用肉浸液肉汤做阴性对照，用已知的链激酶阳性的菌株做阳性对照。

4、杆菌肽敏感试验：取典型菌落的菌液涂布于血平板上，用灭菌镊子夹取每片含有0.04单位的杆菌肽纸片置于上述平板上，36℃培养18-24h，如有抑菌圈出现即为阳性。用已知的阳性菌株做对照。

GB 4789.11-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验

GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验

GB/T 18203-2000 室内空气中溶血性链球菌卫生标准

SN/T 4624.5-2016 入境环保用微生物菌剂检测方法 第5部分：β型溶血性链球菌

SN/T 2754.9-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增（LAMP）检测方法.第9部分：溶血性链球菌

DB15/T 2071-2021  动物垫料中β-溶血性链球菌检测

SN/T 4972-2017  国境口岸溶血性链球菌实时荧光PCR检测方法

GB/T 14926.16-2001 实验动物 乙型溶血性链球菌检测方法

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